Donor darah adalah suatu tindakan menyumbangkan darah untuk memenuhi keperluan transfusi. Kebutuhan darah di Indonesia tahun 2010 - 2016 masih tinggi tetapi darah yang terkumpul dari donor darah masih rendah. Informasi karakteristik donor bisa digunakan untuk mengefektifkan target peningkatan donor, serta meningkatkan keamanan donor dan resipien. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jumlah dan karakteristik donor darah di RSUD Prof. Dr. Margono Soekardjo tahun 2016 – 2020. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif kuantitatif dengan metode total sampling. Populasi penelitian ini adalah seluruh data donor di RSUD Prof. Dr. Margono Soekarjo pada bulan Januari 2016 hingga April 2020 berdasarkan data sekunder dari buku donor darah. Hasil penelitian menunjukkan jumlah donor darah berhasil di RSUD Prof. Dr. Margono Soekarjo tahun 2016 hingga 2020 sebanyak 3130 donor. Donor lebih banyak berjenis kelamin laki-laki (83%) dibandingkan perempuan (17%). Jenis donor pengganti (74%) lebih banyak dibandingkan donor sukarela (26%). Donor pertama kali (67%) lebih banyak dibandingkan donor berulang (33%). Rata-rata berat badan donor keseluruhan 62 kg. Rata-rata kadar hemoglobin donor keseluruhan 18,81 g/dl. Rata-rata tekanan darah sistol dan diastol donor keseluruhan 130,52 dan 77,45 mmHg. Karakteristik golongan darah donor paling banyak adalah golongan darah O dan rhesus positif. Kesimpulan dari penelitian ini adalah hasil analisis karakteristik donor di RSUD Prof. Dr. Margono Soekarjo dapat digunakan sebagai informasi dasar untuk optimalisasi manajemen suplai darah.